什么是荧光定量pcr

时间:05-11
荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)是一种先进的分子生物学技术,它能够在PCR扩增过程中实时检测荧光信号,实现对模板的精确定量。与传统的PCR方法相比,荧光定量PCR具有更高的灵敏度、特异性和可靠性,同时避免了电泳分离和染色处理等繁琐步骤,降低了污染和假阳性的风险。

荧光定量PCR的核心原理是在PCR反应体系中加入荧光标记的探针或染料,这些荧光分子在扩增过程中与目标序列结合,产生荧光信号。通过实时监测荧光信号的变化,可以计算出每个循环的扩增效率,从而确定目标基因的起始浓度。

在荧光定量PCR中,CT值(Cycle Threshold)是一个关键参数,它表示荧光信号达到预设阈值所需的循环数。CT值与起始浓度的对数呈线性关系,具有很好的重现性。利用CT值,可以进行两种类型的定量分析:绝对定量和相对定量。绝对定量用于测定目的基因在样本中的分子数目(拷贝数),而相对定量则用于比较不同样本中目的基因含量的相对比例,无需知道每个样本的具体拷贝数。

荧光定量PCR在分子生物学研究中具有广泛的应用,包括核酸定量分析、病原微生物或病毒含量的检测、转基因动植物基因拷贝数的检测、RNAi基因失活率的检测等。
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